| عناوین بحث ها | ارسال کننده | پاسخها | بازدید | بروز رسانی | اولویت | |
|---|---|---|---|---|---|---|
|
|
38
|
207
|
89/10/30 (10:32)
|
|
||
|
|
2
|
4
|
91/3/10 (13:37)
|
|
||
|
|
0
|
0
|
91/2/29 (13:09)
|
|
||
|
|
1
|
66
|
91/1/26 (00:45)
|
|
||
|
|
19
|
169
|
91/1/26 (00:15)
|
|
||
|
|
1
|
5
|
91/1/3 (00:02)
|
|
||
|
|
9
|
170
|
90/9/11 (13:47)
|
|
||
|
|
0
|
1
|
90/9/4 (11:27)
|
|
||
|
|
1
|
12
|
90/8/17 (15:47)
|
|
||
|
|
1
|
12
|
90/8/13 (00:50)
|
|
||
|
|
0
|
6
|
90/8/12 (23:39)
|
|
||
|
|
15
|
126
|
90/4/2 (19:54)
|
|
||
|
|
1
|
46
|
90/3/28 (21:10)
|
|
||
|
|
1
|
87
|
90/2/3 (13:38)
|
|
||
|
|
0
|
49
|
90/2/3 (13:37)
|
|
||
|
|
0
|
13
|
89/7/7 (11:46)
|
|
||
|
|
10
|
49
|
89/4/18 (01:57)
|
|
||
|
|
1
|
38
|
89/4/18 (01:46)
|
|
||
|
|
3
|
46
|
89/4/15 (21:46)
|
|
||
|
|
0
|
14
|
88/12/26 (09:53)
|
|
دوستان عزیزم تصمیم داریم تو این بحث راجع به تکنیک های مهندسی ژنتیک صحبت کنیم لطفا اگه اطلاعاتی راجع به این تکنیک ها دارید تو این بحث شرکت کنید .
MLPA
روش MLPA در سال 2002 توسط Schouten و همکارانش در هلند، ابداع شد. این تکنیک شکل ویژه ای از روش multiplex PCR است ودر آن می توان بیش از 40 منطقه را همزمان بررسی کرد.این روش یک روش کمی است.این تکنیک قادر به بررسی تغیرات copy number توالی هایی با بیش از 45 نوکلئوتید می باشد . این روش تکنیک بسیار کارآمدی برای بررسی حذفها ومضاعفشدگیهای کروموزومی است وحتی قادر به تشخیص توالیهایی با تفاوت در یک نوکلئوتید از هم میباشد .اصول این تکنیک بر مبنای شناسایی توالی های هدف از طریق هیبریداسیون یک جفت پروب است که به دو طرف ناحیه مورد نظر متصل می شوند و در صورتی که اتصال به طرز صحیحی صورت گیرد در مرحله ی بعدی طی یک واکنش ligation دو پروب مجاور به هم متصل می شوند. و سپس طی یک واکنش PCR این مناطق تکثیر می شوند. هر پروب MLPA، شامل دو الیگونوکلئوتید است که هر دو به توالی هدف در مکان های دقیقاً مجاور هم هیبرید میشوند. هر دو الیگونوکلئوتید شامل یک توالی کوچک 22-43 نوکلئوتیدی مخصوص هدف و یک توالی متصل شونده به یکی از پرایمرهای PCR هستند که برای همه پروب ها عمومی است، به این معنی که ما تنها از یک نوع پرایمر برای تکثیر تمام توالی های هدف استفاده می کنیم در صورتیکه در روش multiplex PCR ما برای هر منطقه که می خواهیم تکثیر کنیم نیاز به یک جفت پرایمر مخصوص آن ناحیه داریم. مقدار نسبی هر یک از محصولات PCR، با تعدادکپی های توالی هدف متناسب است. طول های مختلف محصولاتPCR امکان جداسازی انها از هم را با روش الکتروفورز لوله ی موئینه فراهم می کند .
. این روش به طور کلی شامل 5 مرحلهی اصلی است:
1.مرحلهی دناتوراسیونDNA
2.مرحلهی هیبریداسیون : در این مرحله پروبهای خاصی به مناطق مورد نظر اتصال مییابند.
3.مرحلهی Ligation :در این مرحله با استفاده از آنزیم لیگاز اتصال پروبها به هم نیز صورت میگیرد.
4 .PCR
5 .جدا سازی محصول MLPA با استفاده ازدستگاه الکتروفورز لولهی موئینه
6.آنالیز اطلاعات با استفاده از نرم افزار های خاصی مانند Gene Marker
همانطور که گفته شد این تکنیک یک روش کمی است و از طریق مقایسه ی نمونه های مورد نظر با نمونه های مرجع توانایی آشکار سازی حذف ها و مضاعف شدگی ها را دارد.
